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FITC荧光标记抗体是目前较为常用的标记抗体的方法，FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶，性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下，FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。

一个抗体分子上能标记15~20个FITC分子，被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力，在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光，通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析，从而对抗原进行定性、定位或定量。下面就跟随小编一起来了解其操作步骤吧！

FITC荧光标记抗体的操作步骤：

1、用碳酸氢钠缓冲液pH9.8稀释抗体为1-5mg/m1，或抗体对该缓冲液充分透析，以足以使赖氨酸不解离(去其正电荷)，但注意保持大部分蛋白质仍未变性；

2、将透析袋放入100m1含0.1mg/MIfitc的pH9.8碳酸氢钠缓冲液(新配制)的烧杯中，用铝铂包烧杯以避光，4℃搅拌过夜；

3、上述抗体液对PBS在4℃透析以终止反应。其间至少更换PBS液三次，直致480nm的吸收为零；

4、加入0.5g/L的叠氮钠。此后，结合物在4℃避光保存，或分装后在-20℃冻存。

FITC荧光标记抗体注意事项：

1、偶联反应要求在尽可能接近pH9.8的溶液中进行，而且注意在反应过程中要保持此pH水平；

2、要确定在偶联反应缓冲液中不含游离氨基(Tris，氨及叠氮钠均可与FITC反应，因此会降低蛋白质与FITC的偶联率)；

3、FITC与蛋白质的比值(F/P)，可通过测定495m与280nm吸光度来鉴定。此比值的范围应为0.3-1.0。

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